Gel VS CE 1: ผลการตรวจดีเอ็นเอด้วยเจล ไม่เหมือนกับใน CE

     จากการตรวจพิสูจน์ดีเอ็นเอ เนื่องในโอกาสฉลองครบรอบ 40 ปี คณะแพทศาสตร์ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ เราพบผู้เข้ารับการตรวจรายหนึ่ง เมื่อค้นประวัติเก่า พบว่ามีข้อมูลเคยตรวจดีเอ็นเอมาแล้ว เมื่อปี 2550 เมื่อเปรียบเทียบผลการทดสอบ พบว่า ข้อมูลการตรวจที่ตำแหน่ง D16S539 ซึ่งในเวลานั้นทำด้วยวิธีการย้อมสีเจล มีผลการตรวจไม่ตรงกับวิธี Capillary electrophoresis (ดูตำแหน่งที่ 8. D16S539)

     ทำให้ต้องย้อนกลับไปค้นภาพเจล ที่ scan ภาพเก็บไว้ พบว่าได้ดังภาพล่างนี้ครับ

     ภาพนี้ ใช้ K-562 เป็นตัวควบคุมคุณภาพ ได้ค่า 11, 12 ถูกต้องครับ

     Allelic ladder ในที่นี้มีค่า 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14

     Alleged father อ่านได้ผลเป็น 11, 11

     Child คนที่ 1 อ่านได้ผลเป็น 9,11

     Child คนที่ 2 อ่านได้ผลเป็น 11, 11

     หมายเหตุ : การทดสอบนี้ใช้น้ำยา in-house ทำ PCR 30 รอบ ย้อมสีเจลด้วย Silver stain อบเจลให้แห้ง แล้ว scan ภาพเก็บเป็นไฟล์อิเล็กโทรนิก

     หลังจากเปรียบเทียบผลกับกราฟจากวิธี CE แล้ว พบว่า ของพ่อ (alleged father) อ่านได้ผลเป็น 11, 15 ขณะที่วิธีเจล อ่านได้ผลเป็น 11, 11 คำถามที่ตามมา คือ  15 มันมีจริงหรือไม่ ?

     เมื่อดูจากเจล คงต้องตอบว่า 15 มีจริงครับ แต่เนื่องจากในเวลานั้นเรายังมีประสบการณ์ด้านการอ่านผลเจล ไม่มากนัก จึงต้องตอบว่าเป็นการอ่านผลการทดสอบที่ผิดพลาดครับ  แม้จะมีเหตุให้อ้างได้บ้าง อย่างเช่น

     1. ค่า 15 ที่อ่านได้ เกินกว่าช่วง ladder ที่มีอยู่ (8-14)

     2. หากที่ตำแหน่งนี้ เป็น 11, 15 หรือ heterozygous allele ความเข้มของแถบสี ก็ควรใกล้เคียงกัน แต่ในภาพนี้ จะเห็นว่า แถบสีมีความเข้มต่างกันมาก

     เชื่อเถอะครับ แม้ว่าจะหาข้ออ้างอย่างไร ......เมื่อรายงานผลผิดพลาด ก็ตอบได้เลยครับว่า.....ฟังไม่ขึ้น

     การที่ค่าอ่านได้ 15 แม้จะอยู่นอก allelic ladder แต่เป็นค่าที่ใกล้เคียงกัน จริงๆแล้ว เป็นสิ่งที่ควรจะเฉลียวใจว่า อัลลีล 15 ก็น่าจะเป็นค่าที่เป็นไปได้ในคนทั่วไป อย่าว่าแต่ 15 เลยครับ แม้จะเป็นค่า 16 หรือ 17 ซ้ำ ก็ยังเป็นค่าที่อาจเป็นไปได้เช่นกัน  ในที่นี้คงต้องตอบว่า ผมขาดความเฉลียวใจครับ และนอกจากนั้น ผมควรที่จะสะสมค่า allelic ladder ให้มีค่าครบถ้วนสมบูรณ์มากกว่าที่เป็นครับ

     ส่วนการที่แถบสีของแต่ละอัลลีลมีความเข้มไม่เท่ากัน เป็นเรื่องที่อาจพบได้ในบางราย และบางตำแหน่ง เพราะฉะนั้น ก็ใช้เป็นข้ออ้างไม่ได้เหมือนกัน

     เอาเป็นว่า บันทึกไว้....เผื่อว่าจะเป็นประโยชน์กับบางท่านครับ

[ครูอ้อย แซ่เฮ]

เป็นกำลังใจให้เสมอค่ะ คุณไมโต ที่นี่ค้ะ