GotoKnow
  • เข้าระบบ
  • สมัครสมาชิก
  • แผงจัดการ
  • ออกจากระบบ
GotoKnow

ชุดปั่นล้าง sequencing reaction แบบใหม่

     หลังจากการทำ PCR แล้ว หากต้องการเอาไป sequence ด้วยเครื่อง sequencer ก็จะต้องมีขั้นตอนของการทำ PCR อีกรอบด้วย reaction kit สำหรับ เครื่อง sequencer โดยใช้ primer แยกกันระหว่าง forward กับ reward primer แล้ว การทำ PCR รอบหลังนี้ จะใช้สี fluorescence ติดฉลากด้วย ปกติ ก็มักจะนิยมซื้อเป็นชุดสำเร็จรูป แล้วหลังจากทำ PCR รอบหลังนี้ ก็จะต้องมีการล้างทำความสะอาดเพื่อแยก PCR product ออกจากสี primer และสารต่างๆ ที่อาจรบกวนการวัดของเครื่อง ซึ่งแต่เดิมเขาใช้วิธีการสกัด DNA อีกรอบหนึ่ง อาจจะใช้ 3M NaOAc แล้วปั่นล้างด้วย alcohol  ซึ่งใช้เวลาในขั้นตอนนี้ประมาณ 1 ชั่วโมงหรือนานกว่านั้น  แต่ในขั้นตอนนี้ แล็บที่นี่เปลี่ยนไปใช้ชุดการแยก PCR product ออกจาก สารรบกวนอื่นๆ โดยใช้ชุดกรองสำเร็จรูป ซึ่งทำได้โดยเพียงการเติม PCR product เข้าไปในหลุมของ plate สีฟ้า (ดังที่เห็นในภาพ) แล้วเอาไป suction เพียง 3-5 นาที จากนั้นล้างอีกรอบด้วย injection fluid แล้ว elute เอา DNA ออกมาจาก membrane จากนั้นก็เอาเข้าเครื่อง sequencer ได้เลย ทั้งหมดใช้เวลาในขั้นตอนนี้ประมาณ 10-15 นาที และสามารถทำพร้อมกันได้ทั้ง 96 หลุม  ส่วนหลุมไหนที่ยังไม่ได้ใช้ ก็เก็บเอาไว้ใช้ภายหลังได้ ซึ่งสะดวกกว่าวิธีการเดิมค่อนข้างมาก
    
ภาพนี้ขอยืมมาจาก http://www.millipore.com/images/large/892801-06[738-ALL].jpg
     อุปกรณ์ประกอบที่ต้องมี คือ vacuum ประมาณ 15-20 psi 1 ตัว กับ device สำหรับต่อ plate นี้เข้ากับ vacuum เท่านั้นครับ
     ส่วนราคาในบ้านเรา ผมไม่ทราบครับ เพียงแต่ใช้ที่นี่แล้วติดใจครับ

บันทึกนี้เขียนที่ GotoKnow โดย 

หมายเลขบันทึก: 54461
เขียน:
แก้ไข:
ความเห็น: 24
อ่าน:
สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ

ความเห็น (24)

  • ครูอ้อยมาเยี่ยมแล้วนะคะ  คุณไมโต  บ้านสวยมาก  สอนบ้างซิคะ
  • ช้างไชโยไม่ได้มาด้วย 
  • วันนี้หนาแน่น  เครื่องช้ามากๆ 
  • ครูอ้อยทำการบ้านอยู่ค่ะ 
  • อ่านการบ้านครูอ้อยหรือยังคะ  ที่นี่ค่ะ
  • ใช้ photoshop ทำภาพครับ ขนาด 1000x100 พิกเซล
  • พิมพ์ตัวอักษรเข้าไปแล้วแต่ง layout ครับ
  • ใส่ภาพห่านป่าเข้าไป
  • ใช้ filter lens flare (อยู่ใน Render)
  • เท่านั้นเองครับ
  • เคยอ่านการบ้านเรื่องนี้มาแล้วครับ ใน blog.212cafe
  • link ไปที่ file เสียหรือเปล่าครับครูอ้อย เพราะ link ไปไม่ได้
  • ลองดูใหม่ซิคะ  พยายามแล้วนะคะ
  • แงแง   อ่านแล้วหรือคะ  ทำไมลืมได้อิอิ  ขออภัยค่ะ
  • ทำหัวป้ายสวยมาก ชอบรูปนกครับ
  • กลัวพี่เมตตาเอานกไปเลี้ยง
  • สบายดีนะครับ
  • ขอบคุณมากครับคุณขจิต
  • รูปนกได้มาจากของฝากป้าเมตตาครับ เลยถือโอกาสใช้ทำบ้านใหม่เสียเลย
  • สบายดีครับ คิดถึงคุณขจิตเสมอ ว่างๆ จะหานกไปฝากครับ
  • เพิ่งกลับมาจากชายแดน
  • แวะมาทักทายครับ
  • ขอบคุณมากครับ
  • ว่าจะเอาปืนมายิงนก 3 ตัวครับ
  • มีน้องนิกร
  • แล้วมีน้องนกไหมครับ
  • แวะมาทักทายครับ
  • ชอบเรื่องเล่าครับ
  • บ้า ลามก
สวัสดีค่ะคุณขจิต....ตามคุณขจิตมาค่ะ
  • พี่เมตตามาเมื่อไร งง งง
  • อยากดูเรื่องสนุกๆในญี่ปุ่นครับ
  • ขอบคุณมากครับ
  • จะกลับมาเมืองไทย ช่วงไหนครับ
  • เผื่อมีโอกาสได้พบกันครับ
แวะมาทักทายลุงหนวดครับผม
  • สบายดีไหมครับ
  • แวะมา
  • ขอบคุณครับผม
แวะมาขอบคุณครับผม เป็นอย่างไรบ้างครับผม
  • แวะมาทักทาย
  • คิดถึงครับ
  • ที่ญี่ปุ่นอากาศเป็นอย่างไรบ้างครับผม
  • มาทักทาย ซามูไรลูกสองครับ
  • ยิ้ม ยิ้ม
  • สบายดีไหมครับ
  • เงียบไปนานมาก
  • ขอบคุณมากครับที่แวะไปเยี่ยมที่บันทึก
  • แวะมาขอบคุณครับผม
นี่คุณลุงจะตามมาขอบคุณทุกบันทึกเลยหรือครับ เหนื่อยแย่เลย อย่างนี้ต้องหาไม้เท้าเตรียมไว้ให้แล้วล่ะครับ
  • ไม้เท้าไว้ทำอะไรครับ
  • ผมยังไม่แก่ ไว้ให้พี่เมตตา หรือคุณNidnoi ดีไหม ยิ้ม ยิ้ม ขอบคุณครับ
  • จะตามมาทุกครั้งที่ว่างครับผม
รออ่านเรื่องใหม่ๆครับผม
ครับ ผมก็รออยุ่เหมือนกัน
  • อยากอ่านอีกครับ
  • ขอบคุณที่ไปทักทาย หวังว่าคงมีเรื่องสนุกๆนะครับ