รายละเอียดการทำ 2 large overlap PCR product fragments

Mitochondria

เลือก amplify  2 เส้นใหญ่ก่อน ได้แก่ 4F27R และ 26F5R

Primer sequence

4F: AAGCATAATATAGCAAGGACTAACC ตำแหน่งที่ 1814-1838

27R: ATAGAGAGGTAGAGTTTTTTTCGTG ตำแหน่งที่ 11028-11052

26F: CGGCTTCGACCCTATATCC ตำแหน่งที่ 10175-10193

5R: CCATAGGGTCTTCTCGTCTTG ตำแหน่งที่ 2713-2733 

 

ขั้นตอนการทำ PCR

 รายละเอียด ปริมาณ 
 DW 31 ul
 5xBuffer GC 10 ul 
 dNTP (ABI) 2 mM each  5.5 ul
 primer (each) 1+1 ul 
 Phusion enzyme 0.5 ul 
 DNA template 1 ul 

 

PCR condition for 4F27R

Program STMT4F  เครื่อง PCR No 1

 step Temperature  Time 
 1  98C 30 S 
 2  98C 10 S 
 3  66C 30 S 
 4  72C 6 Min
 5  Goto step 2 for 35 additional cycles  
 6  72C 10 Min 
 7  4C 5 Min 

PCR condition for 26F5R

Program STMT26E  เครื่อง PCR No 5

 step Temperature  Time 
 1  98C 30 S 
 2  98C 10 S 
 3  72C 6 Min
 4 Goto step 2 for 35 additional cycles  
 5   72C 10 Min 
 6  4C  5 Min 

run electrophoresis using 0.5% agarose gel (100 ml 0.5x TAE buffer + agarose 0.5 g)

run 100 V 30 min

use 1 kb marker as a ladder

 หมายเหตุ ใช้ Agarose type I ของ sigma Cat No A6013-500G

บันทึกนี้เขียนที่ GotoKnow โดย  ใน บันทึกการรายละเอียดการเรียน

คำสำคัญ (Tags)#phd#mitochondria#pcr condition

หมายเลขบันทึก: 124884, เขียน: 04 Sep 2007 @ 12:18 () , แก้ไข, 24 May 2012 @ 15:38 (),  | , สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ, อ่าน: คลิก
บันทึกล่าสุด


ความเห็น (0)