สำหรับคำถามของคุณ pookpic นั้น พี่โอ๋อยากให้ลองเริ่มจากการวัดความเข้มข้นของ DNA ที่ extract มาได้ดูก่อนนะคะ เพราะถ้าทำ PCR เหมือนกันในชุดเดียวกัน (หมายถึงใช้ mastermix เดียวกัน) แล้วได้ product จากแค่ 2 รายอีก 8 ไม่ขึ้น ก็อาจจะเป็นเพราะจุดเริ่มต้นต่างกันได้ด้วยเหมือนกัน

แต่ถ้าบอกว่า primer dimer เยอะมากด้วยก็น่าจะเป็นเพราะ condition ที่ใช้ยังไม่ optimum ซึ่งก็จะอธิบายได้ด้วยว่าทำไมจึงไม่ได้ product ทุกราย ถ้าเป็นแบบนี้ก็ต้องลอง optimise ดูใหม่ด้วยการปรับเปลี่ยนความเข้มข้นของ Mg++, annealing temperature

สำหรับการคำนวณ condition นั้นเราทำเองยากค่ะ เพราะมีหลายปัจจัยที่เกี่ยวข้องในการคำนวณ เพราะเดี๋ยวนี้เขาสามารถจะ simulate reaction จาก primer sequence ได้ด้วยคอมพิวเตอร์กันแล้วค่ะ มี free software มากมายให้เลือกใช้นะคะ ลองเช็ค primer ที่ใช้อยู่กับโปรแกรมพวกนั้นดูก็ได้ค่ะ (ลองอ่านบันทึกนี้ตั้งแต่ต้น แล้วก็ตามลิงค์ไปอ่านรายละเอียดดูนะคะ คงจะช่วยให้คิดหาวิธีแก้ปัญหาได้มากขึ้น)

ได้แก้ปัญหาเยอะๆแบบนี้ถือเป็นโชคดีนะคะ ได้เรียนรู้วิธีการลองผิดลองถูกด้วย  พี่โอ๋ว่า PCR นี่เป็นทั้งศาสตร์และศิลป์จริงๆค่ะ ขอให้โชคดีนะคะ