คุณนัทคะ พี่โอ๋รู้สึกว่าการตรวจ HBV ด้วย Real Time PCR Taqman probe เท่าที่อ่านๆดู เป็นงานที่ค่อนข้างตรงไปตรงมามากเลยนะคะ ยกตัวอย่างจาก paper ที่เอามาแปะข้างล่างนี้ ลองอ่านตรงที่ขีดเส้นใต้ดูนะคะ พี่โอ๋ใส่คำอธิบายเพิ่มเติมให้นิดหน่อย

World J Gastroenterol (2005) 11: 508-10.

Detection of hepatitis B virus DNA by real-time PCR using TaqMan-MGB probe technology.

JR Zhao, YJ Bai, QH Zhang, Y Wan, D Li, XJ Yan

AIM: To develop a real-time PCR for detecting hepatitis B virus (HBV) DNA based on TaqMan technology using a new MGB probe. METHODS: Plasmid containing the sequence of X gene (1414-1744 nt) was constructed as HBV-DNA standard for quantitative analysis. (เขาใช้ standard จาก plasmid ซึ่งก็เป็นวิธีปกติทั่วๆไปน่ะค่ะ เพื่อให้ได้ยีนที่ต้องการแล้วเราสามารถวัดปริมาณได้ แล้วก็เอามาทำเป็น standard ด้วยการทำ dilution ต่างๆให้ครอบคลุมปริมาณเชื้อใน sample ที่เราจะตรวจหา) A TaqMan-MGB probe between primers for amplification was designed to detect PCR products. (ออกแบบ probe ที่เอาไว้ detect PCR products ที่ต้องการ ก็คือ HBV) The interested sequence contained in the plasmid and in clinical specimens was quantitatively measured. (แล้วก็เอา sample มา run เทียบกับ standard ที่ได้จาก plasmid ก็จะวัดปริมาณใน sample ได้) RESULTS: The detection limit of the assay for HBV DNA was 1 genome equivalent per reaction. A linear standard curve was obtained between 10(0) and 10(9) DNA copies/reaction (r>0.990). None of the negative control samples showed false-positive reactions in duplicate. HBV DNA was detected in 100% (50/50) of HBV patients with HbeAg, and in 72.0% (36/50) with HBsAg, HBeAb and HBcAb. The coefficient of variation for both intra- and inter-experimental variability demonstrated high reproducibility and accuracy. CONCLUSION: Real-time PCR based on TaqMan-MGB probe technology is an excellent method for detection of HBV DNA.