Protocol การ amplify PCR ด้วย BigDye v 1.1

Mitochondria

BigDye v 1.1 condition

 รายการ  ปริมาณ
 DW 2.5 ul 
 5x buffer 0.75 ul 
 20 pM primer  0.25 ul
 RR mix 0.5 ul 
 template 1.0 ul 

เวลาทำให้ทำแยก upper primer กับ lower primer ออกจากกันคนละหลอด/well

 

 หมายเหตุ เนื่องจาก น้ำยาสำหรับการทำ sequencer ราคาแพงมาก ที่นี่ก็เลย ลดส่วนลงมา จนเหลือ final total volume 5 ul ซึ่งปฏิกิริยาก็ยังทำได้ ยังอ่าน signal ได้ชัดเจนเหมือนเดิม

BigDye v. 1.1 Condition

 Step  Temperature Time 
 1  96C  1 Min
 2  96C  10 s
 3  50C  5 s
 4  60C 4 Min 
 5  goto step 2 for 25 additional cycles  
 6  4C 5 Min 
 

 

 

บันทึกนี้เขียนที่ GotoKnow โดย  ใน บันทึกการรายละเอียดการเรียน

คำสำคัญ (Tags)#phd#mitochondria#pcr condition#bigdye v 1.1

หมายเลขบันทึก: 124912, เขียน: 04 Sep 2007 @ 14:04, แก้ไข, 18 Jun 2012 @ 22:08, สัญญาอนุญาต: สงวนสิทธิ์ทุกประการ, อ่าน: คลิก
บันทึกล่าสุด


ความเห็น (0)