คู่มือการทดสอบ Special Tests : 17-OHCS
17 – Hydroxycorticosteroid หรือ (17 – OHCS) ไม่ว่าจะส่งวันไหน สิ่งส่งตรวจจะเก็บเอาไว้ในตู้เย็น และจะนำมาทำในวันพุธ
ความสำคัญ
17 – OHCS เป็น metabolites ของ Cortisol การตรวจหา 17 – OHCS ต้องการทราบหน้าที่ของ adrenal grand หรือ pituitary gland กลีบหน้า ซึ่งหาปริมาณได้โดยปฏิกิริยา Poster – Stiber วิธีนี้มีความจำเพาะสำหรับสเตียรอยด์ ซึ่งมี dihydroxy acetone side chain ได้แก่: Tetra hydrocortisol (THF), 5 – alpha – tetrahydrocortisol, Tetrahydro cortisol (THF), ), 5 – alpha – tetrahydrocortisone ส่วนใหญ่ของ metabolites เหล่านี้ถูกขับออกในปัสสาวะในรูป conjugated กับ glucoronic acid ที่ C - 3
หลักการ
นำสารที่สกัดได้ทำ Porter – Siber Reaction โดยใช้ phenylhydrazine Sulfuric acid mixture ทำปฏิกิริยากับ dihydroxyacetone side chain ที่ C – 17 วัดเทียบสี
น้ำยา
1.
Sulfuric acid
62 % (V/V) : H2SO4 620 ml
น้ำกลั่น 380 ml
2.
Phenylhydrazine
– sulfuric acid reagent : Purified Phenylhydrazine cystals
(เก็บ Freezer) 125 mg เติม 62 % Sulfuric
acid 200 ml
3.
Chloroform –
butanol solvent : Chloroform 1000 ml เติม n – butanol
100 ml. เขย่าให้เข้ากัน
4.
Sulfuric acid 5
N : เจือจาง 14 ml conc. H2SO4
กับน้ำกลั่น 100 ml
5.
Ammonium
sulfate (NH4)2SO4
6.
Stock standard
: ละลาย cortisone acetate
100 mg ใน n-butanol
และเจือจางสารระลายเดียวกัน 100 ml
เก็บไว้ในตู้เย็น (ความเข้มข้น 83.3 mg/dl)
Working standard : เจือจาง Stock standard 2 ml.
ด้วย n-butanol
เก็บไว้ในตู้เย็น (ความเข้มข้น 16.6
mg/dl)
วิธีทำ
1.
เก็บปัสสาวะ
24 hr.
ไว้ในตู้เย็นระหว่างเก็บถ้าทำได้
วัดปริมาตรทั้งหมด
2.
นำปัสสาวะ
3 ml
ใส่ในหลอดฝาเกลียว ขนาด 25 X 150 mm
เติม 0.1 ml 5 N Sulfuric acid
3.
เติม
Ammonium
sulfate 3 g เขย่าเป็นเวลา 1 นาที
(สังเกตว่ายังคงมีผง Ammonium sulfate เหลืออยู่
ถ้าไม่มี ก็ให้เพิ่ม Ammonium sulfate
)
4.
เติม
Chloroform –
butanol จำนวน 30ml. เขย่า 15
วินาที ปั่นแยก 5 นาที
แล้วดูดส่วนชั้นบนทิ้งไป
5.
นำส่วนที่เหลือมาแบ่งใส่หลอด
15 X 150
mm ออกเป็น 2 หลอด หลอดหนึ่งเป็น blank และ
หลอด test
6.
เตรียมหลอด
15 X 150
mm สำหรับ reagent และ Standard
ทำตามขั้นตอนดังตาราง
| TB | T | RB | R | SB | S | |
| Chloroform – butanol (ml) | - | - | 10 | 10 | 9.9 | 9.9 |
| Working Std. | - | - | - | - | 0.1 | 0.1 |
| 62 % H2SO4 (ml) | 2 | - | 2 | - | 2 | - |
Mix
|
Phenyl. 2SO4(ml) |
- | 2 | - | 2 | - | 2 |
Mix
7.
ปั่นทุกหลอด 15
นาที แล้วดูดส่วนใสชั้นบนใส่หลอด 13 x 100 mm
อย่างระมัดระวัง
8.
นำหลอดทั้งหมดไป
heat
ที่อุณหภูมิ 55 - 60
องศาเซลเซียส
9.
อ่านค่า
OD
ที่ wavelength 410 nm
โดยใช้หลอด blank set 0
การคำนวณ
17 – OHCS
(mg/day) = (T – R)
X 16.6 X Vol. 24 hr. urine
(S
–
R)
1000
17 – OHCS
(mg%) =
(T – R) X 16.6
(S
– R) 10
ค่าปกติ
ผู้ใหญ่ = 1 –10 mg/day
ข้อสังเกต
1. เก็บปัสสาวะ 24 ชั่วโมง
โดยเก็บไว้ในตู้เย็นตลอดเวลา ไม่ใส่สารกันเสียใด ๆ ทั้งสิ้น
ผสมปัสสาวะที่เก็บได้ทั้งหมดให้เข้ากันดี วัดปริมาตรทั้งหมดบันทึกไว้
แบ่งส่วนหนึ่งเก็บในตู้เย็นไว้ ถ้าไม่ได้ทำการทดสอบภายใน 2 –
3วัน ให้เก็บไว้ในตู้แช่แข็ง
เมื่อจะทำการทดสอบควรให้ปัสสาวะละลายอยู่ในอุณหภูมิห้องแล้วเขย่า
ๆ นาน ๆ ให้ทั่วถึงเพราะว่า
corticoids
มักเกาะติดอยู่กับตะกอนที่เกิดในปัสสาวะเนื่องจากการแช่แข็ง
2.
มียามากมายหลายชนิดที่รบกวนในการตรวจวัด 17 – OHCS
เช่น Reserpine (antihypertensive drug)
ทำให้ค่าที่ได้ต่ำ และ Chlordiazepoxide hydrochloride
(librium) และ Etryptamine acetate (Monase)
ทำให้ค่าสูง ยาเหล่านี้บางชนิดถูกกำจัดได้
โดยล้างปัสสาวะนั้นด้วย Carbon tetrachloride
ก่อนทำการตรวจหา
วิธีที่ดีที่สุดควรให้คนไข้งดใช้ยาทุกชนิด 48 ชั่วโมง
ก่อนทำการเก็บปัสสาวะ
3. ค่าปกติของ 17 – OHCS ในการตั้งครรภ์สูงกว่าในระยะที่ไม่ตั้งครรภ์ประมาณ 25 %
เอกสารอ้างอิง
1.
บุญพะเยาว์ เลาหะจินดา, เกรียงศักดิ์ อิ่มใจ, นันทยา ชนะรัตน์,
ขวัญชัย รัตนเสถียร, พัตราภรณ์ ผลวัฒนะ, ไพโรจน์ สุภาวจิตร, รุจาภา
พิมสังข์, รุ้งสิริ โชติปฏิเวชกุล. คู่มือปฏิบัติการเคมีคลินิก.
สำนักพิมพ์ภาควิชาเคมีคลินิก คณะเทคนิคการแพทย์
มหาวิทยาลัยเชียงใหม่
ความเห็น (10)
ตรวจช้าตรวจเร็วนี่...ค่าผล lab ออกมาต่างกันมากไหมคะ...
...
เป็นความสงสัยส่วนตัวจริงๆ คะ...ไม่เกี่ยวกับงานที่ตนเองทำ...
ขอบคุณคะ
กะปุ๋ม
ขอบคุณคุณ Ka-poom ที่สนใจค่ะ ในความเห็นของผู้เขียนคิดว่าไม่แตกต่างค่ะ หากเราเก็บปัสสาวะไว้ในตู้เย็น ค่ะ แต่อย่าให้ทำเป็นวิจัย R2R เลยค่ะ เพราะวิธีการค่อนข้างยุ่งยากค่ะ
จริง ๆ แล้วแพทย์ก็ไม่ค่อยส่งตรวจค่ะ เพราะปัจจุบันมีการส่งตรวจฮอร์โมน cortisol ซึ่งน่าจะได้ผลเร็วและแน่นอนกว่าหรือไม่ ?
555...
คุณศิริ...ดักคอกะปุ๋มไว้ก่อนเลยนะคะ
ไม่เป็นไรคะ..ไม่เป็นไร...
แต่คุณศิริได้โจทย์การวิจัยใหม่แล้วนี่คะ....(ยิ้มๆๆ)
การส่งตรวจฮอร์โมน cortisol ซึ่งน่าจะได้ผลเร็วและแน่นอนกว่าหรือไม่ ?
แสวงหาคำตอบแก้ความสงสัยนี้เลยคะ...
*^__^*
กะปุ๋ม
หางานให้ผู้เขียนอีกจนได้น๊ะค๊ะ คุณ Ka-poom ยอมแพ้ค่ะ รับไว้พิจารณา หรือต้องกลับมาค้นก่อนให้ได้คำตอบแน่นอนแล้วจะตามไปบอกค่ะ
ว่าแต่ติดตามจากบันทึกของคุณเอื้อ (อ.ปารมี) สงสัยเหมือน อ.อัครินทร์ค่ะ ยังเป็นโสดหรือเปล่า ?
ช่วยตอบแก้ความสงสัยเลยค่ะ....
*^_^*
555....
ขำขำ....คุณศิริ...งานนี้ต้องให้ อ.ปารมีไขเฉลยแล้วล่ะคะ....อ๊ะ!!! หรือกะปุ๋มต้องทำ R2R กับโจทย์ข้อนี้ดีคะ...(ขำก๊าก.....เลยคะ)
....
*^__^*
กะปุ๋ม
การส่งตรวจฮอร์โมน cortisol
ได้ผลเร็วกว่าค่ะ เพราะทำด้วยเครื่อง Automate
แน่นอนกว่าหรือไม่ ?
เดาเอาว่าน่าจะเป็นอย่างนั้นค่ะ ในแง่ของ sensitivity ของ test เพราะวัดได้ถึงระดับ microgram
สำหรับเรื่องเป็นโสดหรือไม่....
จากการติดตามความเคลื่อนไหว (อ่านบันทึก) ของคุณกะปุ๋ม มานาน...ขอให้คำตอบว่า
โสด...แน่นอนค่ะ...ฟันธง
คุณ nidnoi
วันนี้อารมณ์ดีเพราะโดนแซว...ชอบใจคำตอบความเห็นคุณ nidnoi...ฟันธงๆๆๆๆ....ว่าชอบๆๆๆ...555
...
สงสัยกะปุ๋มจะลองเขียนบันทึก..ลับๆๆ...เกี่ยวกับเรื่องรักๆๆ..ของกะปุ๋มดีไหมคะ...ว่าแต่ว่า trip ที่จะไปปายน่ะอย่างลืมชวนกะปุ๋มนะคะ...
*^__^*
กะปุ๋ม
เห็นด้วยกับผู้เขียนมั๊ยค๊ะคุณ Ka-poom ว่าคุณ nidnoi เป็น"ผู้รอบรู้" ในทุก ๆ เรื่องจริง ๆ เล่นเอาฟันธงแบบนี้ เชื่อแล้วค่ะ
ว่าแต่อิจฉาคนโสดจังเลยฝากเที่ยว + เก็บรูปมาฝากด้วยด้วยแล้วกันค่ะ
คุณ nidnoi หากไปสวน
ก็อย่าลืมภาพสวยๆ...มาฝากกันหน่อยบ้างเด้อ(นะคะ)
*^__^*
กะปุ๋ม