VMA (Vanilmandelic acid ; 3 –
methoxy – 4 hydroxymandelic acid) :
การทดสอบทำเป็นประจำทุกวันศุกร์ บางสัปดาห์มีตั้งแต่ 1 ราย ถึง 10 ราย
แพทย์สั่งตรวจบ่อย
การตรวจวัดปริมาณ
VMA ในปัสสาวะ
มีประโยชน์ในการช่วยวินิจฉัยโรคเนื้องอกของอะดรีนาลเมดุลลา
ที่เรียกว่า pheochromocytoma
VMA
เป็นเมตาบอไลท์ของฮอร์โมนอีพิเนฟริน (epinephrine)
และ นอร์อีพิเนฟริน (norepinephrine)
ซึ่งมีชื่อเรียกรวมกันว่าคาทีโคลามินส์ (catecholamines)
ซึ่งถูกสร้างจากเซลล์เนื้อเยื่อที่เรียกว่า
เซลล์โครมาฟฟิน (chromaffin cells)
พบในอวัยวะหลายชนิดในร่างกาย เช่นสมอง หัวใจ ปอด ตับ ลำไส้
และต่อมหมวกไตชั้นในที่เรียกว่า อะดรีนาลเมดุลลา (adrenal
medulla) คาทีโคลามินส์ที่ถูกหลั่งเข้ากระแสเลือด
และมีการเปลี่ยนแปลงทางเคมีเกิดเป็น คือ VMA
ซึ่งถูกขับถ่ายออกจากร่างกายพร้อมปัสสาวะ
ปริมาณ VMA
ในปัสสาวะขึ้นอยู่กับปริมาณฮอร์โมนคาทีโคลามินส์ทุกชนิดในพลาสมารวมกัน
โดยทางอ้อม( total catecholamines) การสร้างฮอร์โมนคาทีโคลามินส์มากผิดปกติ
ดังนั้นปริมาณคาทีโคลามินส์ในกระแสเลือดจึงมีมากผิดปกติ
และทำให้ VMA
ที่ถูกขับออกทางปัสสาวะมีปริมาณมากตามไปด้วย
การมีฮอร์โมนคาทีโคลามินส์ในพลาสมาสูง
ก่อให้เกิดอาการที่สำคัญอย่างหนึ่งในผู้ป่วย
คือการมีความดันโลหิตสูง (hypertension)
การตรวจวัดปริมาณ VMA
ในปัสสาวะจะช่วยให้ทราบถึงสาเหตุของการมีความดันโลหิตสูงในผู้ป่วยว่าเกิดจากโรค
pheochromocytoma หรือไม่
หลักการ
(
วิธี Azo dye )
VMA ในปัสสาวะจะถูกสกัดออกโดย Ethly acetate
ในสารละลายกรดและมีเกลือ sodium chloride อิ่มตัว
ต่อมาสกัด VMA ออกจาก Ethly acetate
ด้วย sodium citrate buffer pH 4.0
ปรับสภาพให้เป็นด่างด้วยน้ำยา Potassium carbonate pH
10.4 ในสภาพที่เป็นด่าง VMA จะรวม (couple)
กับน้ำยา diazotized paranitroaniline
ได้สารมีสี (azo dye stuff)
สกัดสารมีสีออกมาจากสารรบกวนอื่น ๆ โดย Normal butanol
และวัดเทียบสีที่ 578 nm
1.
Citrate
buffer 0.2 mol/L, pH 4.0 : ชั่ง Citric acid 42.02 gm
ละลายน้ำให้ครบ 1 ลิตร และชั่ง sodium
citrate 58.82 gm ละลายน้ำให้ครบ 1 ลิตร
ผสมสารละลาย Citric acid 85 ml กับสารละลาย
sodium citrate 60 ml เข้าด้วยกัน ปรับวัด pH
ให้เป็น 4.0
2.
Potassium
carbonate 2 mol/L, pH 10.4 : ชั่ง Potassium carbonate
276.42 gm ( 2 mol) ละลายน้ำให้ครบ 1 ลิตร
เติมกรด HCl เข้มข้น 50 ml ปรับ pH
ด้วยกรด HCl เข้มข้นจนได้ pH
10.4
3.
Sodium
metaperiodate 0.2 mol/L : ชั่ง Sodium metaperiodate
(NaLO4) 0.43 gm ละลายในน้ำกลั่น 10 ml
สารละลายนี้มีอายุ 2
สัปดาห์
4.
สารละลาย
Para
– nitroaniline
0.1 % W/V : ชั่ง Paranitroaniline (4 – nitroaniline)
0.5 gm ละลายด้วยกรดเกลือเข้มข้น 3 ml
แล้วเติมน้ำจนครบ 500 ml
น้ำยานี้เก็บได้นานเป็นปีที่อุณหภูมิห้อง
5.
Sodium
nitrite 0.05 % W/V : ชั่ง Sodium nitrite 0.05 gm
ละลายในน้ำกลั่น 100 ml
น้ำยานี้เก็บในตู้เย็นและใช้ได้ 2
เดือน ควรเตรียมใหม่
ๆ
6.
Ammonium
sulfate 0.025 %W/ V : Ammonium sulfate 0.025 gm
ละลายในน้ำกลั่น 100 ml
เก็บสารละลายนี้ในตู้เย็นและใช้ได้นาน 1
เดือน
7.
Diazotized
Paranitroaniline : ผสมสารละลาย Para – nitroaniline 3
ml กับสารละลาย Sodium nitrite 3 ml
เขย่าตั้งทิ้งไว้ 2 นาที เติมสารละลาย
Ammonium sulfate 3 ml เขย่าผสมให้เข้ากัน
และใช้น้ำยานี้ภายใน 2 ชั่วโมง น้ำยานี้ต้องเตรียมใหม่ ๆ
ก่อนใช้ทุกครั้ง
8.
Hydrochloride acid 2 M :
เติมน้ำกลั่นประมาณ 50 ml ลงใน Volumetric
flask ขนาด 100 ml
แล้วปิเปตต์กรดเกลือเข้มข้น 16.6 ml ใส่ลงไปช้า ๆ
เติมน้ำจนถึงขีด
9.
Sodium
Chloride (AR)
10.
Ethyl
acetate
11.
N –
butanol (AR)
12.
Standard
VMA 10 mg% ชั่งกรด DL-3-methoxy-4-hydroxy mandelic
acid 10 mg ละลายในน้ำ 100 ml
เก็บที่ –20 0C
ได้ 6 เดือน
หรือเก็บในตู้เย็นได้ 3 –4 สัปดาห์
มีความเข้มข้น 100 mg/L เก็บไว้เป็น
stock นำ stock
มาเจือจางให้มีความเข้มข้นของ VMA เป็น 10,
20, 40 mg/L โดยดูดมา 5,10 และ 20 ml
ใส่ลงใน Volumetric flask ขนาด 50 ml.
แล้วเติมน้ำจนถึงขีด เก็บในตู้เย็นได้ 2 – 3
สัปดาห์
วิธีทำ (วิธีดัดแปลงของ Gerhard Gumboldt)
Urine(ml) | Urine blank(ml) | Standard(ml) | Standard blank(ml) | |
Urine /STD. HCl 2 M ผง NaCl (g.) Ethyl acetate |
2.0 |
- - - - |
2.0 |
- - - - |
ปิดจุกเขย่า 1 นาที แล้วนำไปปั่น 5 นาที
ดูดชั้น Ethyl acetate (บน) | 4.0 | - | 4.0 | - |
Citrate buffer pH 4.0 | 5.0 | - | 5.0 | - |
ปิดจุกเขย่า 1 นาที แล้วนำไปปั่น 5 นาที
ดูดชั้น buffer (ล่าง) - แบ่ง | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
Potassium carbonate buffer | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
NaIO4 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
เขย่า | 15 วินาที | 6 นาที | 15วินาที | 6 นาที |
Diazotized-p-nitroaniline | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
เขย่า | 15 วินาที | 15วินาที | 15วินาที | 15 วินาที |
n-butanol | 4.0 | 4.0 | 4.0 | 4.0 |
เขย่าแรง ๆ 10 วินาที แล้วดูดชั้น n-butanol ไปวัด OD ที่ 578 nm โดยใช้น้ำกลั่นเป็น blank
การคำนวณ
VMA (mg/d) = U -
UB X CS X Volume
urine24 24hr.
S –
SB
100
1.5 – 8.0 mg/d (ในคนไทยมีรายงานค่าปกติ1.5 –10 .0 mg/d)
ค่าปกติของ
VMA ใน Random Urine :
อายุ
1 –5 ปี
=10.42 – 23.64 ug/mg of Creatinine
6 – 10 ปี =
7.07 – 13.57 ug/mg of Creatinine
11 – 15
ปี = 6.37 – 15.37
ug/mg of Creatinine
16 – 30
ปี = 4.57 – 10.67
ug/mg of Creatinine
31
– 60 ปี = 3.85 –
11.73 ug/mg of Creatinine
1.
เก็บปัสสาวะ
24
ชั่วโมงใส่ขวดที่มี 6 M HCl จำนวน 10
ml
2.
หากปัสสาวะต่ำกว่า
500 ml
ควรเติมน้ำกลั่นให้ครบ 1000 ml แทนปริมาตร
24 ชั่วโมงที่ได้จริง
3.
ปัสสาวะถ้าปรับ
pH
ให้ต่ำกว่า 2 และเก็บที่อุณหภูมิ
40C จะไม่มีการสลายตัวของ
amine
ที่มีในปัสสาวะและสามารถเก็บได้นานหลายเดือน
4.
เพื่อขจัดค่าสูงลวงของ
VMA
ในปัสสาวะ ฉะนั้นในช่วง 3
วันก่อนเก็บปัสสาวะและระหว่างเก็บปัสสาวะต้องให้ subject
งดกินสิ่งต่อไปนี้ chocolate, กาแฟ,
กล้วยหอม อาหารที่มีวานิลา ผลไม้พวกส้ม ยาต่าง ๆ เช่น
Aspirin, Antihypertensive agents (เช่น aldomet)
5. ขั้นตอนการเตรียม Diazotized
Paranitroaniline ให้สังเกตุด้วยว่าเมื่อเติม Sodium
nitrite สีของ Para – nitroaniline
จะต้องจางลงจนแทบไม่มีสีเลย หากสีไม่จางลงให้เตรียมใหม่
โดยลองเขย่าขวดน้ำยา Sodium nitrite ก่อนที่จะผสมกับ Para –
nitroaniline แต่ถ้าหากลองแล้วสีก็ยังไม่ลด อาจเกิดจากน้ำยา
Para – nitroaniline เสื่อม เพราะการเก็บน้ำยา Para –
nitroaniline ต้องระวังเก็บไว้ในขวดที่ทึบแสง
ขอบคุณค่ะ ได้ความรู้มาก (เรียนแล้วก็ลืม 555)
แล้วปกติก็ไม่ได้ทำเองด้วย ส่งออกอย่างเดียวเลย
อ่านแล้วได้ความรู้เพิ่มครับ
พอดีหมอเพิ่งสั่งเก็บ VMA ผมเมื่อเช้านี้เองครับ
Citrate buffer มีหน้าที่อย่างไรคะ
ช่วยตอบหนูหน่อย
ตอนนี้หนูทำสัมนา เรื่องของ enzyme ที่มี citrate buffer มาเกี่ยวข้อง
แต่ตอนนี้ยังหาคำตอบไม่ได้ค่ะ
ช่วยตอบหนูที
ตอบใน เมลล์ หรือ ที่บล็อกก้อได้ค่ะ บล็อก oraya khruangthip
พอดีมีความดันโลหิตสูงค่ะ แพทย์ให้ตรวจ vma ผล =13.4 และ 12.6 ตอนนี้อายุ 27 ปีค่ะ ไม่ทราบว่าผิดปกติหรือไม่ ทำCT ผลปกติค่ะ และไม่ทราบว่าจะวินิจฉัยเป็นอะไรได้บ้างคะ
มีประโยชน์มากเลยครับ ขอบคุณมากครับ บ
ขอบคุณมากนะคะ ^^
ขอบคุณนะคะ อ่านแล้วเข้าใจเลยค่ะ
ค่าปกติ อ้างอิงจากแหล่งไหนเหรอคะ