Protocol การ amplify PCR ด้วย BigDye v 1.1

BigDye v 1.1 condition

รายการ	ปริมาณ
DW	2.5 ul
5x buffer	0.75 ul
20 pM primer	0.25 ul
RR mix	0.5 ul
template	1.0 ul

เวลาทำให้ทำแยก upper primer กับ lower primer ออกจากกันคนละหลอด/well

 

 หมายเหตุ เนื่องจาก น้ำยาสำหรับการทำ sequencer ราคาแพงมาก ที่นี่ก็เลย ลดส่วนลงมา จนเหลือ final total volume 5 ul ซึ่งปฏิกิริยาก็ยังทำได้ ยังอ่าน signal ได้ชัดเจนเหมือนเดิม

BigDye v. 1.1 Condition

Step	Temperature	Time
1	96C	1 Min
2	96C	10 s
3	50C	5 s
4	60C	4 Min
5	goto step 2 for 25 additional cycles
6	4C	5 Min